산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle 에는 약 10분 정도 시간을 충분히 주어서 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
‣Lysis buffer
-50mM KCl -10mM Tris (pH 8.3)
-2.5mM MgCl2 -0.45% NP
- 세포 이동을 제어하는 단백질 : mig 17
- 세포의 운명을 결정하는 단백질 : Cki
- 노화조절 메카니즘 : daf-2, daf-16
- 선충을 대상으로 한 연구에서 수컷이 원래 암컷보다 더 오래 살도록 되어 있다는 것
- 선충의 생체 시계 유전자 : clk-1, clk-2, clk-3
- 노화를 억제하는 유전자 발견 : mev-1
위와 같은 연구
3. 실험 방법
◉ protein 준비
1) plate에서 S media 1ml로 worm을 모은 다음 2~3회 워싱 한다.
2) ice에서 20분간 bacteria가 모두 소화 될 수 있도록 한다.
- ice에서 하는 이유는 worm의 필요 없는 활동은 가능한 억제한 채로, 소화만 이루어질 수 있도록 하기 위함.
3) 5000g에서 30초간 centrifuge 한 후, worm만 남
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
-S medium(선충이 크는데 필요한 영양소가 모두 갖추어진 액체배지이다.)
-NGM media(고체배지)
-Sample "T": 1mg/ml(이것은 타우린으로 바카스 안에 들어있는 성분이다. 피로를 쌓이지 않게 해주어 활동성을 증가시켜준다.
Method
Sample stock(1mg/1ml)을 S mediu
실험 방법
◉ 이중 돌연변이 제작
① 두 개의 돌연변이 주를 각각 관찰하여, 수컷과 자웅 동체를 구별한다.
- 웅체의 꼬리 쪽이 자웅동체에 비하여 가늘고 털 같이 보이는 것이 달려있음을 이용하여 현미경으로 관찰하여 구별한다.
② 웅체가 더 많이 존재하는 돌연변이 주를 선택하여, 웅체만